干旱脅迫研究NMT標(biāo)準(zhǔn)化方案
干旱脅迫研究NMT標(biāo)準(zhǔn)化方案
一、視頻資源
二、參考文獻(xiàn)
三、常測(cè)哪些指標(biāo)
K+、Ca2+、H+、Cl-、NO3-、NH4+、IAA、H2O2
四、檢測(cè)這些離子流、分子流,有什么生物學(xué)意義
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1)K+生理功能概述
2)科研案例
a.案例1
PEG脅迫激活了轉(zhuǎn)基因黃檗的保衛(wèi)細(xì)胞K+外排,Ca2+和H+內(nèi)流,結(jié)合熒光探針和分子實(shí)驗(yàn),共同幫助作者加深對(duì)LEA基因功能的理解,并有助于工程化抗旱樹(shù)種。
Yang J et al. Overexpression of TaLEA3 induces rapid stomatal closure under drought stress in Phellodendron amurense Rupr. Plant Sci. 2018;277:100-109.

b.案例2
在干旱脅迫下,大豆葉肉的H+內(nèi)流和K+和Ca2+外排與許多生理特性都高度相關(guān),結(jié)合氣孔特性、植物生長(zhǎng)量等實(shí)驗(yàn)結(jié)果,說(shuō)明這些離子的變化可能是大豆干旱脅迫程度的化學(xué)信號(hào)和重要指標(biāo)。
Mak, Michelle el al. Leaf mesophyll K+, H+ and Ca2+ fluxes are involved in drought-induced decrease in photosynthesis and stomatal closure in soybean. Environmental and Experimental Botany. 2014, 98, 1-12.

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2)科研案例
a.案例1
短期脅迫下油松Ca2+內(nèi)流加強(qiáng),長(zhǎng)期脅迫下在根尖伸長(zhǎng)區(qū)Ca2+外排加強(qiáng);柴松在短期與長(zhǎng)期干旱脅迫下較對(duì)照不同程度地加強(qiáng)了Ca2+外排。結(jié)合TAE、Eosin-Y等處理下的油松和柴松K+和Ca2+流速實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,油松通過(guò)較高的H+-ATP酶活性調(diào)控依賴 去 極 化 激 活 的 離 子 通 道 限 制K+外流,同時(shí)通過(guò)Ca2+-ATP酶與Ca2+ 通道調(diào)控細(xì)胞Ca2+跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),在組織與根尖表皮細(xì)胞上減少K+流失并維持Ca2+平衡,因而較柴松抗旱性強(qiáng)。
王樹(shù)源, 王富, 唐佳琪,等. 干旱脅迫對(duì)油松和柴松鉀鈣離子流的影響. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2018. doi:10.13207/j.cnki.jnwafu.2018.01.004

b.案例2
PEG處理1 h后叢枝菌根真菌根(AMF)外菌絲尖端和側(cè)面發(fā)生H+外流和強(qiáng)烈的Ca2+內(nèi)流,結(jié)合熒光光譜和場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果,共同表明, 干旱脅迫下AMF根外菌絲跨膜H+和Ca2+流發(fā)生變化, 促進(jìn)了菌絲與環(huán)境之間的物質(zhì)交換。菌絲酸化生長(zhǎng)環(huán)境有利于養(yǎng)分吸收, 并促進(jìn)AMF與宿主植物之間的信號(hào)交流以增強(qiáng)植物的耐旱性。
徐麗嬌, 郝志鵬, 謝偉,等. 叢枝菌根真菌根外菌絲跨膜H+和Ca2+流對(duì)干旱脅迫的響應(yīng). 植物生態(tài)學(xué)報(bào), 2018, 42(07):66-75.

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1)H+生理功能概述
2)科研案例
a.案例1
干旱脅迫誘導(dǎo)了H+內(nèi)流,導(dǎo)致茶樹(shù)葉肉細(xì)胞膜電位去極化并誘導(dǎo)大量K+外排。隨后復(fù)水誘導(dǎo)了H+外排,導(dǎo)致膜電位超極化,從而降低K+的外排。說(shuō)明,干旱和復(fù)水下茶樹(shù)的葉肉中K+的維持與質(zhì)膜H+-ATPase活性的調(diào)節(jié)有關(guān)。
Zhang XZ et al.Maintenance of mesophyll potassium and regulation of plasma membrane H~+-ATPase are associated with physiological responses of tea plants to drought and subsequent rehydration.The Crop Journal,2018,6(06):611-620.

b.案例2
進(jìn)行短期水分脅迫處理下,野生型擬南芥與rhe2突變體距離靜止中心 0~150 μm 的 H+離子流由正常條件下的吸收轉(zhuǎn)變?yōu)橥馀?,其他部位H+離子流流速減小,吸收的趨勢(shì)不變,總體上能夠保持正常條件下的 H+離子流平衡,距離靜止中心 300~500 μm(過(guò)渡區(qū))的 H+離子流吸收趨勢(shì)不變,吸收速率隨時(shí)間逐漸減小,這可能與植物在干旱環(huán)境下通過(guò)分泌大量分泌物來(lái)維持細(xì)胞伸長(zhǎng)過(guò)程有密切關(guān)系。
李佳, 黃夢(mèng)靜, 任艷,等. 水分脅迫對(duì)向水性突變體rhe2根生長(zhǎng)與響應(yīng)的影響.土壤, 2015, 047(005):858-862.


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2)科研案例
誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗性、高度敏感抗性和熱抗性;引起細(xì)胞衰老,誘導(dǎo)程序性死亡;參與ABA調(diào)控的氣孔關(guān)閉;參與根的向地性、生長(zhǎng)和不定根形成;細(xì)胞壁發(fā)育的信號(hào)分子;參與柱頭和花粉粒的發(fā)育與相互作用;參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo);調(diào)控基因表達(dá)。
例1:高溫和干旱脅迫下,非損傷微測(cè)技術(shù)監(jiān)測(cè)到發(fā)芽種子胚芽鞘的H2O2外排,結(jié)合ROS、丙二醛含量檢測(cè),及抗氧化酶活性分析,表明高溫和干旱條件下ABA和ROS的積累,可以抑制水稻種子的萌發(fā)和生長(zhǎng)。
Liu J et al. High temperature and drought stress cause abscisic acid and reactive oxygen species accumulation and suppress seed germination growth in rice. Protoplasma. 2019;256(5):1217-1227.

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2)科研案例
a.案例1
與沒(méi)有接種AMF的植物相比,在正常水分條件下和干旱脅迫條件下,接種AMF的植物根部IAA外排降低58%和41%。結(jié)合其他生理實(shí)驗(yàn)和分子實(shí)驗(yàn)結(jié)果,共同說(shuō)明AMF可以促進(jìn)枳的根毛生長(zhǎng)和IAA的合成和運(yùn)輸,有利于提高寄主植物的抗旱性。
(Liu CY, Zhang F, Zhang DJ, et al. Mycorrhiza stimulates root-hair growth and IAA synthesis and transport in trifoliate orange under drought stress. Sci Rep. 2018;8(1):1978. Published 2018 Jan 31. doi:10.1038/s41598-018-20456-4)

b.案例2
在干旱條件下,枳的菌根幼苗的葉和根中H2O2、O2和MDA濃度顯著低于非菌根幼苗。與非菌根幼苗相比,菌根幼苗在主根和側(cè)根中的根凈H2O2外排量相對(duì)較高,尤其是在正常水分條件下;而在正常水分和干旱下,主根和側(cè)根中的總H2O2外排量顯著較高。根總H2O2外排量與根部定殖顯著正相關(guān),而與MDA濃度呈負(fù)相關(guān)。這表明菌根誘導(dǎo)了主根和側(cè)根的H2O2外排量增加,從而減輕了宿主植物中干旱引起的氧化損傷。
Huang YM et al. Alleviation of drought stress by mycorrhizas is related to increased root H2O2 efflux in trifoliate orange. Sci Rep. 2017;7:42335.

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2)科研案例
內(nèi)源H2S誘導(dǎo)擬南芥及lcd的突變體的K+外排,Ca2+和Cl-內(nèi)流,但不影響H+的跨膜移動(dòng)。干旱脅迫下,在H2S對(duì)氣孔運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)過(guò)程中,K+通道是主要的滲透調(diào)節(jié)應(yīng)答器。因此,H2S介導(dǎo)離子通量,誘導(dǎo)擬南芥氣孔關(guān)閉響應(yīng)干旱脅迫。
Jin Z et al. Hydrogen sulfide mediates ion fluxes inducing stomatal closure in response to drought stress in Arabidopsis thaliana. Plant & Soil, 2017. doi:10.1007/s11104-017-3335-5

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2)科研案例
在正常情況下,紅柳根部的白色區(qū)域(white zone)沒(méi)有明顯的NO3-內(nèi)流,但是干旱脅迫下,NO3-內(nèi)流顯著增加,N保存能力增強(qiáng),為土壤干旱和缺N耦合條件下的造林實(shí)踐和紅柳育種提供指導(dǎo)。
Zhang L et al. Characterization and comparison of nitrate fluxes in Tamarix ramosissima and cotton roots under simulated drought conditions. Tree Physiol. 2019;39(4):628-640.

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2)科研案例
實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)增加外源N可以緩解干旱脅迫對(duì)植物生長(zhǎng)帶來(lái)的負(fù)面影響,而干旱脅迫下海棠果的NO3-內(nèi)流降低,NH4+內(nèi)流顯著增加,說(shuō)明NH4+在改善海棠果耐旱能力方面發(fā)揮了更重要的作用。
Huang L et al. Uptake and metabolism of ammonium and nitrate in response to drought stress in Malus prunifolia. Plant Physiol Biochem. 2018;127:185-193.

參見(jiàn)《植物營(yíng)養(yǎng)研究NMT解決方)NO3-生理功能概述
五、可以檢測(cè)哪些樣品
1、動(dòng)物樣品
1)細(xì)胞
神經(jīng)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等
2)組織器官
腫瘤、皮膚、胃粘膜、胰島、腦(海馬體等)、胚胎(大鼠、魚(yú))、斑馬魚(yú)皮膚/鰓、耳蝸、心臟(香螺)、卵(魚(yú)、雞蛋、爪蟾)、骨骼、角膜、脊椎(豚鼠)、肌肉組織(肌纖維、心?。?/p>
3)其它動(dòng)物樣品
珊瑚、螨蟲(chóng)、昆蟲(chóng)(果蠅幼蟲(chóng)的腸、蟑螂血腦屏障、按蚊、長(zhǎng)紅錐蝽)、蝌蚪、水蛭、藍(lán)蟹(微感毛)、變形蟲(chóng)、水絲蚓
2、植物樣品
1)營(yíng)養(yǎng)器官
莖:邊材、心材、微管形成層、木質(zhì)部
葉:表皮細(xì)胞、葉肉細(xì)胞、鹽腺細(xì)胞、保衛(wèi)細(xì)胞
2)生殖器官
花:花瓣、花瓣表皮細(xì)胞、花粉
種子:整體、胚
果實(shí):果殼、果皮、果肉(蘋(píng)果、柑橘)、籽粒、棉花纖維、棉桃
3)細(xì)胞:植物懸浮細(xì)胞、液泡
4)愈傷組織
3、微生物樣品
酵母細(xì)胞、菌絲、菌落、微藻、細(xì)菌(大腸桿菌)
4、其它生物樣品
周叢生物
5、非生物樣品
金屬、混凝土、泥沙、納米材料、生物醫(yī)藥材料
六、樣品需要做哪些前處理
國(guó)際領(lǐng)先的非損傷微測(cè)技術(shù)最大的特點(diǎn)就是活體、無(wú)損檢測(cè),因此動(dòng)植物材料在檢測(cè)前,不需要任何的液氮速凍、染色、研磨處理等。
1、動(dòng)物單細(xì)胞
因NMT是活體檢測(cè),故從培養(yǎng)箱中拿出來(lái)后,置于培養(yǎng)皿中,直接檢測(cè)即可。
2、動(dòng)物組織
因NMT是活體檢測(cè),無(wú)需提前處理。如檢測(cè)部位天然暴露在外,如斑馬魚(yú)皮膚離子細(xì)胞、側(cè)線毛細(xì)胞,直接檢測(cè)即可。如檢測(cè)部位位于體內(nèi),需在檢測(cè)時(shí)暴露出檢測(cè)部位(可采用麻醉的方式),后檢測(cè)即可。
3、植物根莖葉等組織器官
天然暴露在外的組織器官,例如根、莖、葉的表面,無(wú)需任何處理,直接檢測(cè)即可。水培、土培、砂培、平板培養(yǎng)均可。
4、植物原生質(zhì)體/液泡
因NMT是基于微傳感器/探針的非損傷檢測(cè),檢測(cè)時(shí)不接觸樣品,故原生質(zhì)體、液泡需要從組織或者細(xì)胞中,提取出來(lái)后檢測(cè)。
5、植物葉片的表皮細(xì)胞、葉肉細(xì)胞、鹽腺細(xì)胞、保衛(wèi)細(xì)胞
無(wú)需提前處理。因這些細(xì)胞處于組織內(nèi)部,故檢測(cè)時(shí)采用撕取等方式,暴露出相應(yīng)細(xì)胞即可。
6、植物花粉管
離體萌發(fā):在培養(yǎng)皿中萌發(fā)一段時(shí)間后即可直接檢測(cè);在體萌發(fā):將柱頭置于培養(yǎng)皿中,待萌發(fā)一段時(shí)間后即可直接檢測(cè)。
7、植物果實(shí)
無(wú)需提前處理。如待測(cè)部位位于果實(shí)內(nèi)部,需在檢測(cè)前暴露出相應(yīng)部位即可。
8、植物懸浮細(xì)胞
無(wú)需提前處理。檢測(cè)時(shí),置于培養(yǎng)皿中檢測(cè)即可。
七、有哪些檢測(cè)方式?
1、實(shí)時(shí)處理 /瞬時(shí)處理后檢測(cè)
即瞬時(shí)處理,是指在檢測(cè)過(guò)程中,在正常測(cè)試液中瞬間加入所需的干旱脅迫溶液(PEG或甘露醇等溶液)的處理方法,目的是為了觀察瞬間干旱脅迫下,樣品短時(shí)間內(nèi)的離子/分子的變化趨勢(shì),即短時(shí)效應(yīng)。
2、預(yù)處理/提前處理好后檢測(cè)
是指在干旱脅迫一段較長(zhǎng)的時(shí)間后(數(shù)十分鐘/數(shù)小時(shí)/數(shù)天),觀察植物離子/分子進(jìn)出的情況,即長(zhǎng)時(shí)效應(yīng)。
八、檢測(cè)環(huán)境是空氣還是溶液
檢測(cè)時(shí),只要求待測(cè)部位浸于溶液中(無(wú)需整體都浸在溶液里)。
九、樣品是如何檢測(cè)的
十、可以送樣檢測(cè)嗎
可以送樣檢測(cè)。目前非損傷微測(cè)技術(shù)測(cè)試服務(wù)由中關(guān)村NMT產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟統(tǒng)籌管理,由遍布全國(guó)的25家NMT創(chuàng)新平臺(tái)服務(wù)中心,提供檢測(cè)服務(wù)。點(diǎn)擊獲取測(cè)試服務(wù)

十一、哪里能獲取非損傷微測(cè)系統(tǒng)操作培訓(xùn)服務(wù)
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